传染性法氏囊病病毒(IBDV)结构蛋白VP3及其突变体的表达纯化

来源:本站2019-09-0917 次

传染性法氏囊病病毒(IBDV)结构蛋白VP3及其突变体的表达纯化

摘要:传染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease,IBD)是危害世界养禽业的主要传染病之一。 是由传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)引起的一种急性、高度接触性传染病,传染性法氏囊病病毒(IBDV)属双股双节段RNA病毒,该病毒主要扩增部位在雏鸡的中枢免疫器官―法氏囊,因此会造成其免疫抑制,给养鸡业造成巨大的损失。

本次试验采用载入VP3片段的pET28a重组质粒,将其转化到BL21(DE3)pLySS表达菌内,进行下一步纯化。

此外本实验从时间以及IPTG浓度两个方面进行了蛋白诱导表达的条件进行摸索。

同时,本实验还纯化了VP3蛋白以及其突变体:His-VP3(patch),His-VP3(KR),His-VP3△16。 经过初步表达后发现VP3呈上清融合表达和包涵体表达两种形式,因此在后面的实验中选择非变性表达来表达蛋白。 经过对诱导条件的探索筛选得到最佳诱导条件,并在此条件下进一步大量表达得到纯度较高的VP3蛋白及VP3蛋白的突变体。 28596关键词:传染性法氏囊病毒(IBDV);VP3蛋白;蛋白纯化Expressionandpurificationofinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)structuralproteinVP3anditsmutantAbstract:Infectiousbursaldisease(IBD)isoneo,highlycontagiousinfectiousdiseasecausedbyinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV),whichpredominantlyamplifyinthecentralimmuneorgansofthechicksbursaofFabricius,(IBDV)isadouble-strandeddouble-segmentRNAvirusthatcandamagechicksbursallymphocytesandcausesevereimmunmentsweretransformedintoBL21(DE3)pLySSexpressingbacteria,ressionVP3proteinwaspurifiedunderdifferentIPTGconcentrationgradientanddifferenttimegradient,,theVP3proteinanditsthreemutantswerepurified:His-VP3(patch),His-VP3(KR)andHis-VP3△,VP3wasfoundtobecleavedandexpressedintwoforms,nconditionsandtheVP3proteinandVP3proteinmutationswerefurtherexpressedundertheseconditions源`自*六)维[论*文网:IBDV;VP3protein;Proteinpurification目录摘要1关键词1Abstract1Keywords1引言21与方法材料重组质粒及重组表达菌表达菌株菌液鉴定所用试剂及缓冲液聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂蛋白质纯化试剂试剂及抗体.主要实验材料生产厂家汇总方法重组质粒转化鉴定重组质粒蛋白的诱导表达蛋白纯化蛋白纯化鉴定92结果与分析重组质粒转化BL21(DE3)plySS感受态细胞及阳性单菌落鉴定初步表达包涵体表达分析诱导表达条之IPTG浓度摸索诱导表达条之时间梯度摸索.大量诱导纯化.(patch),His-VP3(KR),His-VP3△16纯化实验17传染性法氏囊病病毒(IBDV)结构蛋白VP3及其突变体的表达纯化:。

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